細(xì)胞株的核型分析實(shí)驗(yàn)操作研究：

　　進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)的所需材料有：姬姆色素染料；秋水仙素；甲醇；冰乙酸；KCL；0.25%胰酶。

　　實(shí)驗(yàn)儀器包括顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱、水浴鍋、烘箱等。

　　具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：

　　將傳代的細(xì)胞密度調(diào)整為1*105/ml，接種于1個(gè)10cm培養(yǎng)皿，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，約培養(yǎng)48小時(shí)后，加秋水仙素（終濃度為0.2ug/ml），搖勻后37℃孵育1-2h。

　　將培養(yǎng)的細(xì)胞用胰酶消化收集到10ml離心管中，1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，去除上清液，留500ul,先將底部細(xì)胞吹勻，加入8ml 37℃預(yù)溫的0.075M KCL(37℃提前水浴)，打勻后放37℃水浴箱40min，加入新鮮配制的固定液（甲醇/冰乙酸=2/1-3/1）2ml地混勻，室溫下放10min后，1000轉(zhuǎn)/分離心10min，去上清液，留500ul,先將底部細(xì)胞吹勻，新加入8ml固定液，離心清洗、重復(fù)三次后、滴片，放入60℃烘箱老化6小時(shí)（過夜）；再將烤干的玻片放入胰酶（0.25%）中消化1min左右后，再放入吉姆薩染液中染色5-6min，取出用流水沖去染液后，在顯微鏡下觀察結(jié)果。

　　相關(guān)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

　　1.滴片的載玻片需預(yù)先泡酸處理；

　　2.低滲溶液要用無菌水配制；

　　3.低滲溶液，胰酶需要提前預(yù)熱；

　　4.固定液、胰酶、吉姆薩染色液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

>> 返回首頁(yè)